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피부투과성 보툴리눔 독소 결합체 개발

 

in vitro SNAP25 Cleavage Assay
시험 관내 SNAP25 절단 분석


시험 관내에서 다양한 용량의 'Methionyl r-Clostridium Botulinum Polypeptide-1
Hexapeptide-40'으로 GST-SNAP25-EGFR 단백질을 반응시켜 GST-SNAP25-EGFP가 'Methionyl r-Clostridium Botulinum Polypeptide-1 Hexapeptide-40'에 의해 절단되는지 확인. 결과적으로, GST-SNAP25-EGFP 단백질은 GST-SNAP25 (50kDa)로 절단되고 EGFP (25kDa)는 'Methionyl r-Clostridium Botulinum Polypeptide-1 Hexapeptide-40'의 용량에 의존한다.


Buffer condition: 1mM DTT, 1mM HEPES, 1mM NaCl, 2uM ZnCl₂
Reaction : 37℃ 3hrs
SDS-PAGE loading condition - 12% SDS-PAGE - volt : 120V

보툴리늄 성분의 세포 내 침투

 
BoLCA_Protein 의 세포내 침투테스트
분화된 SiMa 세포(인간 신경세포)에 FITC conjugated BoLCA_Protein을 처치. 3 시간 후 세포 내에서 BPMed BoLCA Protein가 확인됨.
FITC 접합 'Methionyl r-Clostridium Botulinum Polypeptide-1 Hexapeptide-40' 단백질을 이용한 분화 된 SiMa 세포 (인간 신경 모세포종)에 대한 세포 처리 3 시간 후, 세포 내에서 단백질을 볼 수 있습니다.  이 결과는 'Methionyl r-Clostridium Botulinum Polypeptide-1 Hexapeptide-40' '이 보툴리눔 단백질의 가장 중요한 표적인 인간 신경 세포에 전달 될 수 있음을 보여준다.

* 처리 조건
– FITC 공액 : 5μgv – 시간 : 3 시간
– 방법 : 공 초점
 

Fig 7. BoLCA_Protein에 의한 keratinocytes의 세포 내 침투
시험 관내 SNAP25 절단 분석


각질 세포의 침투
FITC 컨쥬 게이트 된 결과는 'Methionylr-Clostridium Botulinum Polypeptide-1
Hexapeptide-40' 단백질을 이용한 각질세포 세포에서의 세포 처리 1 ~ 6 시간 후
세포 내에서 단백질을 볼 수 있습니다. 이 결과는 'Methionyl r-Clostridium Botulinum Polypeptide-1 Hexapeptide-40'이 피부에 침투 할 수 있음을 보여줍니다.

* 치료 조건
– HaCaT 세포
– 펩티드 : 5μm


보툴리늄 성분과 통증 관련 논문


Application of Botulinum Toxin in Pain Management (통증치료의 보톡스 활용.)

Woo Seog Sim Department of Anesthesiology and Pain Medicine,
Samsung Medical Center, Sungkyunkwan University School of Medicine, Seoul, Korea.


Botulinum toxin (BTX) is a pre-synaptic neuromuscular blocking agent that triggers chemical denervation by temporarily suppressing secretion of acetylcholine at motor nerve endings therefore, BTX injections are useful for diseases with increased involuntary muscle activity or tension
보툴리눔 독소(BTX)는 운동신경말단에서 아세틸콜린의 분비를 일시적으로 억제하여 화학적 퇴화를 유발하는 시냅스 전 신경마비차단제이다.
그러므로, BTX 주사는 무의식적인 근육활동이나 긴장이 증가된 질병에 유용하다.

New therapeutic indications for botulinum toxins.(보툴리눔 독소에 대한 새로운 적응증.)

Cordivari C. Misra VP. Catania S. Lees AJ. Mov Disord. 2004 Mar;19 Suppl 8:S157-61.


Trials of BTX in painful conditions are ongoing mainly on refractory tension headache, migraine, and backache as well as dystonia-complex regional pain syndrome and myofascial pain with promising results. Recently, the fastest growing use for BTX toxin has been in the cosmetic applications.
BTX의 고통스러운 통증 상태에서의 시험은 주로 내화성 긴장성 두통, 편두통 및 요통뿐만 아니라 근긴장성,복합성 통증 증후군 및 근막 통증에 대한 유망한 결과로 진행되고 있다.

Botulinum Toxin for the Treatment of Myofascial Pain Syndromes Involving the Neck and Back: A Review from a Clinical Perspective
(목과 등을 포함하는 근막 통증 증후군의 치료를 위한 보툴리눔 독소 : 임상 적 관점에서의 검토)

José M. Climent,1 Ta-Shen Kuan,2 Pedro Fenollosa,3 and Francisco Martin-del-Rosario4


There is evidence that botulinum toxin could be useful in specific myofascial regions such as piriformis syndrome. It could also be useful in patients with refractory MPS that has not responded to other myofascial injection therapies.
보툴리눔 독소가 piriformis 증후군과 같은 특정 근막 부위에 유용 할 수 있다는 증거가 있습니다.
다른 근막 주사 요법에 반응하지 않은 내화성 MPS 환자에게도 유용 할 수 있습니다.

Botulinum toxin for myofascial pain syndromes in adults (성인의 근막 통증 증후군에 대한 보툴리눔 독소)

Adriana Soares, Régis B Andriolo, Álvaro N Atallah, Edina MK da Silva


Botulinum toxin is a protein produced by the bacterium Clostridium botulinum and is a potent neurotoxin that eventually inhibits muscle contractions. It is capable of selectively weakening painful muscles and interrupting the pain cycle.
보툴리눔 독소는 박테리아 클로스 트리 디움 보툴리눔에 의해 생성된 단백질 이며, 결국 근육 수축을 억제하는 강력한 신경 독소입니다. 
그것은 고통스러운 근육을 선택적으로 약화시키고 통증주기를 방해 할 수 있습니다.

A comparative trial of botulinum toxin type A and methylprednisolone for the treatment of myofascial pain syndrome and pain from chronic muscle spasm.
(근막 통증 증후군 및 만성 근육 경련으로 인한 통증의 치료를 위한 보툴리눔 독소 A 형과 메틸 프레드니솔론의 비교 시험.)

Porta M Pain. 2000 Mar;85(1-2):101-5.


These results indicate the superior efficacy of BTX-A over conventional steroid treatment in patients suffering from MPS, when combined with appropriate physiotherapy.
적절한 물리 치료와 병용 될 때 근막통증증후군(MPS)를 앓고 있는 환자에서 통상적 인 스테로이드 치료에 비해 BTX-A의 우수한 효능을 나타낸다.

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